种植双孢菇用的牛粪以干牛粪为好，牛舍建设的时候，后墙面都留有出粪口，堆放粪便的地方做成水泥地面，向外倾斜，外侧开沟，以便清理牛舍的时候是牛粪和牛尿初步分离，牛粪成堆，牛尿流向沼气池。牛粪堆放沥水后，及时拉到晒粪场晾晒。牛粪晒干后，用编织袋包装储存备用，有条件的可以室内储存，防止霉变。
制作培养料的方法一般是每100平方米菇床用新鲜干麦秸1250~1500公斤、干牛粪400~600公斤，过磷酸钙50公斤、尿素15公斤、石膏粉和生石灰粉各25公斤。将麦秸用清水充分浸湿后捞出，堆成一个大堆，预堆2~3天。同时将牛马粪碾碎、加水调湿后堆起。在建堆后6~7天进行第一次翻堆，同时加入石膏粉和石灰粉，此后间隔5~6天、4~5天、3~4天各翻堆一次，堆制全过程约需25天。最终培养料的水分控制在65%~70%，外观呈深咖啡色，无粪臭和氨气味，麦秸平扁柔软易折断，草粪混合均匀。
在棚内菇床上铺一层3厘米厚的新鲜麦秸，再将发酵好的培养料均匀地铺到菇床上，料层厚15~20厘米为宜。然后消毒换气，当料温降到28℃以下时即可播种。可采用穴播、散播结合法播种，使菌种沉入料内2厘米左右。菌丝定植后进行通风换气，菌丝基本长满料层时进行覆土。覆土后的空间湿度应保持在80%~90%，温度13℃~20℃（最佳温度15℃~18℃）。当蘑菇长到直径2~4厘米时即可采收。
