一、外周血象
乙型肝炎时,白细胞总数正常或偏低。淋巴细胞增多,可出现异型淋巴细胞,但在10%以下。
二、尿检查
在急性黄疸型、慢性和重症肝炎患者,可出现尿胆红素阳性,尿胆原和尿胆素增多。淤胆型肝炎时,尿胆红素强阳性,但尿胆原和尿胆素减少或消失。在有HBV相关性肾炎时,可出现尿蛋白阳性,镜下有多数红、白细胞和管型。
三、血清酶检测
肝细胞内酶含量十分丰富,约占肝蛋白总量的1/3。几乎所有的酶都多少不等地存在于肝细胞中。肝细胞内所含的酶是血浆(清)酶类的主要来源。血清酶活性测定对判断肝细胞的各种代谢功能和病理改变有一定价值。
(一)血浆特异酶
又称血浆功能酶,在血浆中发挥催化作用。血浆中的浓度明显高于其他组织。
1.凝血因子和纤溶酶原多数凝血因子和纤溶酶原都是血浆特异酶,主要有凝血酶原(第Ⅱ因子)、前激肽释放酶和纤维蛋白溶酶原。
2.参与脂蛋白代谢的两种酶包括脂蛋白脂肪酶和卵磷脂胆固醇酰基转移酶。
3.铜蓝蛋白亦称亚铁氧化酶。
4.肾素即血管紧张肽原酶。
5.血浆胆碱酯酶亦称伪胆碱酯酶。
上述血浆功能酶除脂蛋白脂肪酶和肾素分别来自组织毛细血管内皮细胞和肾小球旁器外,其余均由肝细胞合成后分泌入血,在血浆中发挥催化功能。由于酶在肝细胞内合成的速率大致与血清白蛋白保持平行,故在肝炎、肝硬化或肝肿瘤时,这些酶活性经常降低,且降低的程度与肝病严重程度相平行,可判断肝脏蛋白质的合成功能,估计肝细胞受损伤的程度。
(二)非血浆特异酶
1.外分泌酶来源于外分泌腺,有极少量逸入血浆。包括淀粉酶(唾液腺和胰腺)、蛋白酶(胃底腺及胰腺)、脂肪酶(胰腺)及酸性磷酸酶(前列腺)等。它们在血浆中的浓度和腺体的分泌功能密切相关。当腺体中酶合成量增多时,分泌到腺体导管中的酶量增加,进入血液的酶量也相应增多。
2.细胞酶细胞酶是指在细胞和组织中参与物质代谢的酶类。这些酶自身不断地进行着合成与分解,在细胞内浓度很高,进入血浆的量很少,在血浆中也没有重要的催化作用。在讨论细胞酶时,一要注意酶在细胞内的分隔分布,二要重视酶的组织器官专一性分布。如AST为线粒体中的酶;鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)、精氨基琥珀酸裂解酶(ASAL)、黄嘌呤氧化酶、乙醇脱氢酶和ALT等,主要存在于肝细胞中。
(三)同工酶在肝细胞内的分布
同工酶是指在同一种属中,由不同基因位点所编码的、一级结构不同的酶。各脏器所含的同工酶不同,因而同工酶的测定特异性强,对病情严重程度的估计和预后的判断更为有利。
(四)肝病时酶的变化
病理情况下,肝脏的酶含量常有改变,并可反映在血液内。根据血清内酶活力的增高或减少,可了解肝脏病变的性质和程度,辅助诊断肝胆系疾病。酶在血清内的含量极微,难以测定其绝对值,通常采用测定酶活力的方法,来衡量血清内酶的改变。在测定酶活力时,可因操作方法和条件的变动,影响其数值。现统一用国际单位制(SI),酶活性单位用nmol/s,即每秒酶触反应转化的底物的量。原用国际单位(IU)者,可按(IU)16.67=(nmol/s)换算。
1.反映肝细胞损害为主的酶类
(1)肝细胞损害时活力增高的酶:主要有ALT、AST、异柠檬酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、山梨醇脱氢酶、谷氨酸脱氢酶、谷胱甘肽S-转移酶、OCT、ASAL、精氨酸酶、腺苷脱氢酶、醛缩酶、磷酸果糖醛缩酶、鸟嘌呤酶、奎宁氧化酶、葡萄糖醛酸苷酶。
(2)肝细胞损害时活力降低的酶:主要有胆碱酯酶、卵磷酯胆固醇转酰基酶。
2.反映胆汁淤积为主的酶类:主要有碱性磷酸酶、5’-核苷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶、亮氨酸氨肽酶。
3.反映肝内纤维组织增生的酶:主要有单胺氧化酶、脯氨酸羟化酶。
(五)乙型病毒性肝炎的血清酶试验
1.主要反映肝细胞损害的酶类
(1)转氨酶及其同工酶转氨酶有数十种,其中以ALT和AST最为重要,许多脏器和组织均有,分布的次序大致为:①ALT:肝>肾>心>肌肉;②AST:心>肝>肌肉>肾。肝内AST绝对值超过ALT。
1)血清转氨酶总活力测定:其正常参考值ALT为0~40U/L,AST为0~40U/L。由于整个肝脏内转氨酶含量约为血中含量的100倍,如果释放的酶全部保持活性,只要l%的肝细胞坏死,便足以使血清中酶活性增加1倍。又由于肝细胞内转氨酶浓度比血清高1000~5000倍,在肝细胞膜损伤,通透性增加时,即使无坏死,细胞内转氨酶也可由于此种浓度差而泄漏入血中。因此,血清转氨酶活性是肝细胞损害的敏感指标。在除外肝外脏器病变的情况下(如急性心肌梗死、心肌炎和肌病),血清转氨酶升高在一定程度上反映了肝细胞损害和坏死的程度,又由于肝内ALT活性超过体内其他任何脏器内该酶的活性,故ALT反映肝损害比AST更具特异性。
ALT增高的原因除乙型病毒性肝炎外,还包括其他因素:
①肝病:急慢性病毒性肝炎、肝硬化、血吸虫病、肝脓肿、肝癌、脂肪肝、中毒性肝炎;
②消化系疾病:急性胃炎、消化性溃疡、消化道出血、慢性结肠炎、胰腺炎、肝外胆道梗阻、胆囊炎、胆管炎;
③传染病:疟疾、伤寒、流脑、上呼吸道感染;
④心血管疾病:急性心肌梗死、急性心肌炎、心力衰竭、休克;
⑤肌病:多发性肌炎、肌营养不良症;
⑥药物:异烟肼、对氨基水杨酸钠、利福平、鲁米那、氯丙嗪、红霉素、磺胺类、呋喃西林、保泰松、他巴唑、甲基睾酮、环磷酰胺、安妥明、血脉宁、口服避孕药、苯甲异噁唑青霉素;
⑦其他疾病:结缔组织病、败血症、肺脓肿、肾盂肾炎、糖尿病、妊娠高血压综合征、网状细胞肉瘤、急性血管内溶血;
⑧其他:营养不良、酗酒、剧烈运动。
几乎所有肝脏疾病都可有转氨酶增高,因而不够特异。ALT超过正常上限2.5倍、持续半个月以上,才能考虑肝胆系统疾病的诊断;若超过正常上限值的20倍,一般只能是肝胆系统的疾病,且常是肝细胞性损伤。
血清ALT活性升高的幅度与肝细胞损伤的严重程度不一定平行。重型肝炎,肝细胞大量坏死,不能合成转氨酶,ALT可不升高或仅轻度升高,而黄疸升高明显,呈“酶胆分离”现象。
2)AST同工酶:AST有两种同工酶,分别位于肝细胞线粒体内(ASTm,占4/5)和细胞浆基质内(ASTs,占1/5)。线粒体损伤时,AST明显升高,反映肝细胞病变的严重性。测定血清中不同形态转氨酶及其比率,具有鉴别诊断的价值。
3)AST/ALT:肝细胞病变较轻,只要细胞膜通透性增加时,细胞浆基质内的ASTs和ALT释放人血,ASTm仍然保存;严重肝细胞坏死时,ASTm也释放入血,使血清AST升高幅度较ALT为大。正常人血清AST/ALT比值平均为1.15。急性病毒性肝炎早期或轻型肝炎时比值降到0.56,至恢复期,比值逐渐上升。病毒性肝炎比值为0.31~0.63者预后佳,1.20~2.26者多凶险。该比值在肝硬化中为1.7~1.8,肝癌患者中半数>3.0。
酒精性肝病时转氨酶总活力常低于正常的l/8,AST/ALT>2.0,这可能由于酒精能促进转氨酶的辅酶——磷酸吡哆醛分解,肝对此种辅酶的摄取减少,从而影响酶活力;ALT对磷酸吡哆醛的依赖性又大于AST,故ALT活性比AST活性降低更甚。
4)ASTm:采用DEAE-SephadexA-50柱层分离法测定ASTm,正常人平均值为(2.3±1.1)U/L,以<5.0U/L为正常。大块肝坏死早期,肝细胞内ASTm大量释放入血清,ASTm水平与坏死程度成正比。ASTm从血清中消失比ASTs快,ASTm长期升高提示病变转为慢性。酒精性肝病、慢性活动性肝炎、原发性肝癌、恶性胆道梗阻和Reye综合征时,ASTm常升高。慢性迁延性肝炎、肝硬化和良性胆道梗阻时常正常。
(2)腺苷脱氨酶(ADA)及其同工酶ADA系核酸分解酶,广泛分布于肝、肾、小肠、肌肉等组织中。肝细胞内90%的ADA存在于细胞浆,当肝细胞炎症、坏死时,酶逸出至血中。
1)ADA总活力:正常值0~25U/L,肝细胞损害时,血清酶值升高,变化与转氨酶大体一致,但有以下优点:①急性肝损害恢复期ADA常较ALT恢复为迟,对肝病的残存病变的反应较ALT为优。ALT恢复正常而ADA持续升高的急性肝炎,常易复发或迁延为慢性肝炎;②慢性活动性肝炎和肝硬化时,ADA异常较ALT为高;③阻塞性黄疸时,ADA正常或轻度升高,与肝细胞黄疸时不同,有助于黄疸鉴别。
2)ADA同工酶:反映急性肝损害的残存病变和慢性肝损害时,ADA2,及ADA2/ADA明显优于ADA总活力。急性肝炎恢复期,ADA2恢复正常往往迟于ALT及ADA。慢性肝病时,ADA总活力尚正常时,ADA2即可升高,且能提示肝损害的严重程度;即ADA2在CPH<CAH≤LC及HCC。
(3)乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶LDH是一种糖酵解酶,广泛存在于人体组织内,以心肌、肾、横纹肌、肝、脑等组织内含量较多,肿瘤组织及正常人血中也可测得此酶。
1)LDH总活力:正常值视测定方法而略有差异。目前大都采用分光光度计法和比色法。正常值:109~245U/L。血清LDH总活力增加无特异性。肝损害时血清LDH升高不明显,可能由于肝细胞释放LDH的同时也释放了LDH的抑制因子,或由于肝释放的LDH半寿期太短所致。作为一项肝细胞功能试验,LDH总活力的价值不大。
2)LDH同工酶:LDH酶蛋白中的多肽链有A(M亚单位)和B(H亚单位)两种,根据排列组合的不同,分为LDH1~LDH5。MMMM型即LDH5,主要存在于横纹肌和肝组织内,HHHH型即LDH1,主要存在于心肌组织内。测定LDH同工酶主要用电泳法,各家报道数值不一,但其含量(%)多少的次序却是一致的,即LDH2(35%~44%)>LDH1(24%~34%)>LDH3(19%~27%)>LDH4(0~5%)>LDH5(0~2%)。
分析血清LDH同工酶有助于病变定位,血清LDH同工酶还是一项敏感的肝损害指标。如心肌梗死时LDH1升高,肝病时LDH2升高,后者反映肝损害往往比转氨酶还要敏感。有59.5%的肝病患者LDH总活力正常而LDH2已升高。
(4)谷氨酸脱氢酶(GDH)该酶为一种线粒体酶,主要分布于肝内,尤以肝小叶中央区为多。正常值为4.5U/L。酒精性肝病主要在肝小叶中央区,为线粒体损害,故血清GDH活性可作为酒精性肝损害的标志,如血清GDH低于正常的1/2.5时,可除外酒精性肝病。
(5)血清谷胱甘肽-S-转移酶(GST)GST是一组与肝脏解毒功能和结合功能有关的小分子蛋白,又称胆红素结合蛋白,存在于细胞浆,半寿期短。由于分子量较ALT小,更易透过肝细胞入血流,反映肝细胞损伤比ALT更敏感。正常值为(13.6±5.81)U/L。GST增高幅度:重型肝炎>慢性肝炎>急性肝炎>肝硬化>HBV携带者。重型肝炎GST水平持续升高,ALT进行性下降,出现“GST/ALT”分离现象,是预后不良的表现,有预测严重肝坏死的价值。
(6)血清卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(LCAT)由肝合成,分泌入血。肝病时LCAT合成减少,血清酶活性降低,且与肝损害程度相一致。在反映肝储备功能方面,优于胆碱酯酶。
2.主要反映胆汁淤积的血清酶
(1)碱性磷酸酶(ALP)及其同工酶肝、胆管、肠、骨、肾、胎盘和白细胞中存在此类功能相同的不同酶。血清ALP活性主要反映骨骼、肝胆和肠道3个来源的同工酶;妊娠后期胎盘ALP亦有很高的水平。正常值<240U/L,儿童高2~3倍。
1)ALP总活力:在胆汁淤积、肝内炎症和癌症时,肝细胞过度制造ALP,经淋巴道和肝窦进入血流,致使血清ALP升高。半寿期7天左右。
凡能干扰肝血流的肝内、外疾病,ALP均甚敏感。部分胆道梗阻时,ALP升高可大大早于其他物质,恢复正常也较迟。ALP为膜结合性酶,在肝细胞内与脂性膜紧密结合;胆汁淤积时,胆汁酸凭借其表面活性作用,可将肝细胞内ALP从脂性膜上渗析出来,故血清ALP升高最显著。如果血清ALP大于正常的2.5倍,AST低于正常的1/10,90%为胆管阻塞;反之90%为肝炎。先天性胆管闭锁如为肝内型,血清ALP显著升高;而肝外形多正常。
肝病时血清ALP升高,是因肝内ALP的释放所致。病毒性肝炎和中毒性肝炎引起的肝细胞性黄疸,约90%患者血清ALP活性升高,除少数患者(<5%)外,多数不超过正常上限的2.5倍;但在肝外阻塞及胆汁淤积时,则超过正常上限的2.5倍。药物引起胆汁淤积时,ALP在胆红素上升之前即已升高,肝内占位病变时升高明显。严重肝损害时,血清ALP往往无明显升高。其原因可能是:①肝细胞内ALP浓度与血清相比,仅高5~10倍,远较转氨酶为低;②肝细胞内ALP与脂性膜紧密结合,不易释放;③肝内ALP主要位于胆管区,远离肝窦,即使肝损伤ALP成为可渗,进入胆汁中的量也多于进入血清中的量。
2)ALP同工酶:常用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)将ALP同工酶分成ALPⅠ~Ⅶ。ALP同工酶对阐明血清中ALP的脏器来源和病变性质有重要价值。
高分子ALP(HM-ALP,ALPⅦ):正常人和非肝病患者阴性,胆汁淤积、转移性肝癌患者往往阳性。肝外型淤胆出现ALPⅦ,肝内型仅ALPⅡ活性增强。ALPⅦ在肝转移癌中的阳性率为98%。
肝癌特异性ALP(ALPⅠ):仅见于原发性肝癌和少数转移性肝癌。
类胎盘型ALP(ALPⅣ):常见于卵巢、睾丸、乳腺、胆管和胰腺肿瘤。
ALPⅥ:见于溃疡性结肠炎活动期。
(2)γ-谷氨酰转肽酶(GGT)广泛分布于人体组织中,肾脏最多,其次为胰和肝。正常人血清GGT主要来自肝脏。
1)GGT总活力:正常值:0~30U/L。升高的机制及临床意义与ALP相似,见于胆汁淤积、肝内炎症或癌肿时。敏感性可能高于ALP。由于GGT在体内分布范围广,易受药物诱导(如受鲁米那等诱导微粒体酶的药物影响),以致其特异性不如ALP。主要价值在于:①判断血清中升高的ALP来自肝还是骨,骨病时GGT正常,同时检测ALP及GGT,若ALP升高,GGT正常,则以骨病可能性大,肝病可能性小;②急性肝炎,GGT下降至正常较转氨酶为迟,如GGT持续升高,提示转为慢性肝病;③慢性肝病尤其肝硬化时,GGT持续低值提示预后不良;④肝外癌肿,动态测定GGT有助于发现肝转移,如GGT持续正常,几乎可排除肝转移;⑤酒精中毒者GGT增高。
2)GGT异质性:①