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第8章 妇产科疾病检查及诊断方法(4)

(1)生殖道支原体感染:支原体是一类缺乏细胞壁,能在无生命培养基中生长繁殖的最小原核生物。因其能形成有分支的长丝,故称为支原体。支原体种类较多,在自然界分布很广,也存在于人、家禽及实验动物体内。与人类感染有关的有支原体属和脲原体属,有关女性生殖道内的支原体属寄居与感染的情况存在不同的看法。多数人认为她们可与宿主共生而不发生感染征象,某些条件下则作为病原体引起感染病变。

【检测方法】

ELISA法,聚合酶链反应(PCR法)。

【临床意义】

①解脲支原体可引起盆腔炎、阴道炎、输卵管炎等,并可通过胎盘感染胎儿,引起早产,死胎或分娩时感染新生儿引起呼吸道感染。②人型支原体可引起宫颈炎、阴道炎、卵巢脓肿及产褥热等。③生殖道支原体与生殖道感染有一定的关系。

(2)生殖道衣原体感染:衣原体是一类能通过细菌滤器,有独特发育周期,专在细胞内寄生的原核细胞类微生物。广泛寄生于人、哺乳动物及禽类体内。仅少数致病,致病因衣原体种类不同而异。衣原体属根据其特性分为三类:沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体和肺炎衣原体。

【检测方法】

①直接免疫荧光法(IFA):将荧光素标记在抗衣原体抗体上,然后滴加荧光抗体于待测标本。经反应后在显微镜下观察。②衣原体胶体金测试纸是近几年来发展的敏感快速的定性检测方法。③血清中抗体测定:ELISA法,血凝试验。

【临床意义】

沙眼衣原体沙眼生物变种D-K型,经性接触传播,引起泌尿生殖道感染。在女性可引起尿道炎、宫颈炎、盆腔炎等。输卵管炎是较严重的并发症。沙眼衣原体性病淋巴肉芽肿生物变种的四个血清型引起性传播性疾病。女性侵犯会阴、肛门、直肠等组织,引起会阴-肛门-直肠组织变窄。

(3)生殖道病毒感染:

①单纯疱疹病毒:生殖道感染主要以Ⅱ型为主,引起阴道和宫颈炎。妊娠期感染可增加流产、死产及新生儿死亡,分娩时胎儿经阴道分娩的过程中感染疾病,可引起新生儿期播散性病毒感染。目前还认为疱疹病毒Ⅱ型可能促进宫颈癌的发生。

②巨细胞病毒:感染往往在子宫颈,但不产生明显症状,因此不被发觉。此病毒能通过胎盘侵袭胎儿或经阴道分娩时感染新生儿,引起流产、胎死宫内、早产、发育障碍、畸形、智力障碍等。

③风疹病毒:风疹是一种症状轻,预后好的病毒性传染病,在临床上易被忽视,但妊娠期母体感染了风疹病毒,可以通过胎盘感染胎儿。其对胎儿的影响与母体发生感染时间的早晚有重要关系。在妊娠前三个月中感染风疹病毒,胎儿发生畸形机会多。随着妊娠进展,对胎儿损害逐渐下降。感染严重,亦可造成死胎及流产。

以上三种病毒可用免疫荧光抗体法、ELISA法和PCR法检测。

④人类乳头状瘤病毒(HPV):HPV可引起一种性传播性疾病-尖锐湿疣,主要通过性接触传染;少数可通过接触病人污物间接传染;也可通过产道感染胎儿。流行病学研究表明,HPV与下生殖道癌有密切联系。临床可用PCR方法行HPV检测。

(4)弓形虫病:是由一种细胞内寄生的弓形原虫感染所引起的。弓形虫病是一种人畜共患病,呈世界性分布。人类弓形虫病的发病率很低,绝大多数感染者呈带虫状态。妊娠期母体感染后,原虫可通过胎盘进入胎儿体内,引起流产,死胎,活产婴儿可发生先天性弓形虫病。

【检测方法】

①免疫荧光法。②酶联法免疫吸附试验检测抗弓形虫抗体。③过氧化物酶-抗过氧化物酶法(PAP)检测组织内的弓形虫。PAP法是常用的免疫组化方法。此法可用于活检组织检测弓形虫包囊、速殖体,具有高度的敏感性和特异性。④PCR法。

(5)梅毒:由梅毒螺旋体感染引起的性传播疾病。病程缓慢且复杂,可累及人体多数器官,如不积极治疗,当累及神经及血管时可致命。梅毒螺旋体可通过胎盘侵入胎儿,引起流产、早产、死产或分娩出先天性梅毒儿。

【测定方法】

血清学检查:化氏反应(补体结合试验),快速血清反应素(PRP),赖氏蛋白补体结合试验和螺旋体制动试验。

(6)获得性免疫缺陷综合征(AIDS):获得性免疫缺陷综合征是一种以细胞免疫功能严重损害为特征的高度传染性疾病。自1981年美国正式报道第一例AIDS病例以来,此病迅速在世界各国蔓延。现已证实AIDS是由一种逆转录RNA的艾滋病毒(HIV)而引起。传染途径主要通过性直接传播、血液传播,以及孕妇感染AIDS病毒后通过胎盘、或产道感染给胎儿,新生儿经母乳也可受到感染。机体在感染了HIV后最早能从血清中检出的免疫标志是HIV-P24抗原。感染后2~3周即可从血清中检出,1~2个月左右进入抗原高峰期,然后随着HIV抗体的产生而消退。HIV抗原再度在血清中增长常提示HIV感染者已经或即将进入艾滋病发作期。

【测定方法】

血液凝集试验,ELISA法和放免法可检测HIV抗体。放免测定试验(RIP)和WESTERN印迹试验可测定病毒结合蛋白。ELISA法具有检测迅速、准确、操作简便、特异性与敏感性较强等优点,可用于大规模普查。Western印迹试验有很高的特异性,为最常用于检测HIV抗体的方法之一。

四、与生殖有关的自身免疫抗体测定和免疫试验

(1)抗精子抗体(AsAb):随着现代生殖免疫不断的发展,实验室检测技术的不断提高,表明一部分不明原因的不育症是由免疫反应所引起的。近年来研究证明精子具有抗原性,能引起同种免疫反应。临床试验中,常进行抗精子抗体测定,协助诊断与指导治疗。

【测定方法】

精子凝集试验、精子制动和细胞毒试验、荧光抗体测定、ELISA法,免疫珠结合试验、间接混合凝集反应(indirectmixedagglutinationreaction,MAR)和精子宫颈黏液接触试验。

【临床意义】

a.不孕症:抗精子抗体对生育的作用取决于其抗体的量、抗体的类型、抗体免疫球蛋白分子与精子特殊结合部位的亲和力,以及有关抗原在生育中所起的作用。近年来认为测定局部生殖道AsAb可能比测定外周血中AsAb价值大。仅在血浆中有关抗精子抗体的IgG、IgM免疫球蛋白,可能与免疫关系不大。外周血中只有10%的AsAbIgG可以进入生殖道局部如卵泡液、宫颈黏液。而IgM不能进入生殖道局部,因为生殖道局部产生的抗精子抗体能导致精子的凝集与制动,影响生育力。b.复发性流产:研究表明抗精子抗体阳性者,妊娠率明显降低。如有怀孕者自然流产率较高。但是在复发性流产患者中,抗精子抗体检出率并不高。临床上对抗精子抗体在复发性流产中的意义仍有争议。

(2)抗磷脂抗体:抗磷脂抗体综合征是近20年来,在生殖医学领域内渐受重视的,与不良妊娠结局密切有关自身免疫性疾病,主要表现为不同级别的动静脉血栓形成、复发性自然流产或宫内死胎。抗磷脂抗体是指机体内能结合于磷脂和磷脂结合蛋白的一组自身抗体。目前,生殖领域内主要检测的抗磷脂抗体主要包括抗心磷脂抗体、狼疮抗凝抗体、抗β2糖蛋白1以及一组负离子磷脂的抗体。

①抗心磷脂抗体(ACL):1906年,在一梅毒患者最早检测到磷脂抗体,能与牛心磷脂结合,因此以后称为抗心磷脂抗体,但直到1983年,才发展成用固相免疫分析技术检测ACL。

【测定方法】

国际上检测ACL主要采用ELISA方法,经过近20年免疫技术的发展和多家试验室的标准化,对于APS的诊断的特异性和敏感性均达到80%~90%。此外还有放免法和流式细胞仪技术。

【临床意义】

a.试验检测:APS患者中主要是ACL的IgG抗体,IgM型ACL较少,动物模型中IgA型的ACL抗体可引起血栓形成,但人类IgA型ACL极少,对诊断APS无价值,IgA型ACL往往伴随IgG和IgM型ACL存在。b.复发性流产:研究表明10%~20%复发性流产患者中ACL检测阳性。ACL可通过激活血管内皮细胞、改变脂类代谢以及影响凝血途径等环节,引起胎盘部位的血栓形成,ACL还影响滋养叶浸润、生长和激素产生,导致胚胎死亡,发生流产。c.早产和妊娠期高血压疾病:部分早产和妊娠期高血压疾病患者也表现为ACL(+)。

②狼疮抗凝抗体(LA):目前无直接检测LA抗体的方法,主要通过一系列的血凝试验间接检测LA。LA可能为IgM或IgM类抗体,结合于凝血途径中凝血酶原复合物的磷脂,所以体外试验中表现为凝血时间延长。体内表现为各级血管血栓形成。

【测定方法】

试验分四步完成:a使用缺乏血小板等提供磷脂的血浆,进行体外磷脂依赖性凝血试验,证明凝血时间延长,试验主要包括外源凝血途径检测凝血酶原时间(PT),凝血时间超过正常对照3s以上有意义;内源性凝血途径检测活化的部分凝血活酶时间(APWI),超过对照10s以上为异常;b加入患者的血浆不能纠正延长的凝血时间;c证明LA存在,加入过量的磷脂或血小板后,能缩短延长的凝血时间;d进行一些确证试验排除存在其他凝血抑制因子。

【临床意义】

a自身免疫疾病:LA在SLE的患者出现频率为5%~37%,对APS诊断特异性较大,但敏感性不如ACL。b.复发性流产和反复IVF失败者LA体内易导致血管内血栓形成,因此妊娠期间胎盘部位血栓形成后,导致胚胎死亡。

③抗β2糖蛋白1(β2GPL):研究发现,部分患者ACL结合心磷脂需要磷脂结合蛋白β2GPL介导,又引起对APS中磷脂结合蛋白的研究。目前发展的抗β2GPL抗体正在广泛的临床试验中,已发现与血栓形成有关。

【检测方法】

主要方法是ELISA,还有放免法。

【临床意义】

a.提高ACL检测特异性:ACL对许多感染性疾病也表现为阳性,如梅毒、丙型肝炎、结核以及微小病毒B感染等,影响了对APS诊断。抗β2GPL抗体对APS、SLE等自身免疫疾病检测表现为阳性,而对ACL(+)感染疾病患者,表现为阴性,因此可区分自身免疫来源的ACL(+)患者,提高ACL试验的特异性。该试验尚未列入APS的诊断标准,其临床价值还在评价中;b.复发性流产:参与ACL作用机制,与胎盘血管血栓形成有关,降低胎盘血供,导致胚胎宫内死亡。

④抗其他磷脂类抗体:抗磷脂抗体还能结合于其他负离子磷脂,包括磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘露醇、磷脂酰胆碱等。目前已有试剂盒(APHL)把集合这些磷脂做成抗原,检测抗这些磷脂的抗体。

【检测方法】

主要采用ELISA方法。

【临床意义】

部分APS和流产患者表现为此类抗磷脂抗体阳性,与血栓形成有关。

(3)抗子宫内膜抗体:现代生殖免疫学研究表明,子宫内膜蛋白具有抗原性。子宫内膜组织能表达MHC-Ⅱ抗原分子,因而能向巨噬细胞、树突状细胞等递呈自身抗原,诱导机体产生抗子宫内膜抗体。它在内膜异位症、不孕症、流产等发病中具有重要作用。抗子宫内膜抗体与抗原结合后,激活补体系统,破坏了子宫内膜正常环境,导致不孕和复发性流产。

【检测方法】

间接荧光法、双响免疫扩散法、间接血凝法、ELISA。

【临床意义】

a.内膜异位症:近年来研究指出外周血、腹腔液可检出抗子宫内膜抗体的存在,同时还可检测到抗磷脂抗体、抗卵巢抗体。说明内膜异位症患者体内存在多克隆B细胞活化,是自身免疫的佐证。b.不孕症:在部分原因不明的不孕症的患者和IVF-ET失败病例中可检测到抗子宫内膜抗体的存在。近年来研究表明“子宫内膜种植窗”在孕卵着床种植中起十分重要的作用。抗子宫内膜抗体的存在破坏了种植窗的正常开放导致早期流产,临床上表现不孕。

(4)抗卵巢抗体AOAb抗卵巢抗体是在艾迪生病(addision)患者中首次发现,以后逐渐在卵巢早衰、内膜异位症、不孕症等患者中被检测到。抗卵巢抗体中作用于产生甾体激素细胞的抗体,在生殖上有较重要的影响。

【测定方法】

间接免疫荧光法、免疫组化、ELISA、流式细胞仪。对于AOA确切的抗原还不清楚,主要包括颗粒细胞抗体、抗卵母细胞抗体以及抗透明带抗体。

【临床意义】

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